酶聯(lián)免疫吸附測定實(shí)驗(yàn)（ELISA）實(shí)驗(yàn)常見問題及解答
在酶聯(lián)免疫吸附測定實(shí)驗(yàn)中，每一個(gè)步驟或環(huán)節(jié)都需要操作者嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，否則可能會(huì)影響到最終結(jié)果?，F(xiàn)就試驗(yàn)中遇到得常見問題進(jìn)行分析總結(jié)，給進(jìn)一步給出解決方案，希望能為幫助相關(guān)實(shí)驗(yàn)人員提供實(shí)驗(yàn)成功率。
| 問題 | 可能原因 | 解決方案 |
標(biāo)準(zhǔn)曲線差 | 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備不正確 | 進(jìn)行正確的標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋 |
| 吸取及洗滌不充分 | 充分的吸取及洗滌 | |
| 移液不精確 | 檢查和校正移液器 | |
| 精密度低 | 洗滌不充分 | 按說明書要求充分洗滌和浸泡 |
| 混勻不充分和吸取試劑不足 | 充分混勻和吸取試劑 | |
| 重復(fù)利用吸頭、容器和覆膜 | 使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的容器和覆膜 | |
| 加樣不精確 | 檢查和校正移液器 | |
| O.D值低 ? | 每孔加的試劑量不精確 | 校正移液器，精確加入試劑 |
| ?溫育時(shí)間不正確 | 保證充足的溫育時(shí)間 | |
| ?溫育溫度不正確 | 試劑要平衡至室溫并保證準(zhǔn)確的溫育溫度 | |
| 酶標(biāo)記物或底物失效 | 通過混合酶標(biāo)記物和底物，顏色應(yīng)迅速顯現(xiàn)來檢查 | |
| ?沒有加入終止液 | ???按照說明書實(shí)驗(yàn)操作步驟加入終止液 | |
| 超出讀數(shù)時(shí)間讀數(shù) | 在說明書推薦的讀數(shù)時(shí)間內(nèi)讀數(shù) | |
| 樣本值? | ?不正確的樣本儲(chǔ)存方式 | 正確儲(chǔ)存樣本，使用新鮮樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn) |
| 不正確的樣本收集和處理方法 | 采取正確的樣本收集和處理方法 | |
| 待測物質(zhì)在樣本中含量低 | 使用新鮮樣本，重復(fù)實(shí)驗(yàn)? |